Comment faire et séparés des molécules d'ADNc

Les cellules utilisent l'ARN messager pour faire la protéine. Nous découvrons gènes par fabriquer de l'ADN complémentaire (ADNc) des copies de l'ARN messager. D'abord nous avons à cloner et produire un grand nombre d'exemplaires de chaque ADNc, de sorte qu'il sera assez pour déterminer ses bases constitutives. Les biologistes moléculaires ont développé des façons d'insérer des ADNc dans des boucles d'ADN spécialisés, appelés vecteurs, qui peuvent reproduire à l'intérieur des cellules bactériennes. Un mélange d'ADNc à partir d'un tissu donné est appelé une bibliothèque.

Des chercheurs de l'HGS ont maintenant préparé des bibliothèques d'ADNc Homo sapiens à partir de presque tous les organes et des tissus normaux, ainsi que de nombreux qui sont malades. Pour faire des copies multiples d'une bibliothèque, nous l'ajouterons à des bactéries qui prennent les vecteurs.

Toutes les bactéries sont ensuite étalés sur une plaque de gel d'éléments nutritifs et a permis de croître en colonies, de sorte que chaque colonie provient d'une seule bactérie. Suivant que nous utilisons un robot qui peut automatiquement sur place et atteignez le gel de ces colonies qui n'ont pas acquis avec succès un ADNc. Le robot accomplit cette mission en couleur. Les vecteurs que nous utilisons sont conçus de telle sorte que s'ils ne parviennent pas à combiner avec un insert d'ADNc, ils produisent un pigment bleu. Le robot, qui prend le relais jusqu'à 10.000 colonies de bactéries tous les jours, identifie ceux qui contiennent des ADNc Homo sapiens en évitant les bleus. L'ADNc de chaque colonie d'élite, maintenant en quantité analysable, est ensuite purifié par robotique.

Une fois une protéine peut être fabriqué dans une forme pure, les scientifiques peuvent assez facilement un mode de test pour le détecter chez un patient. Un test pour révéler surproduction d'une protéine qui se trouve dans la plaque dentaire peut exposer les premiers signes d'athérosclérose, quand de meilleures options existent pour la traiter. En outre, pharmacologues pouvez utiliser des protéines pures pour les aider à trouver de nouveaux médicaments. Un produit chimique qui inhibait la production d'une protéine qui se trouve dans la plaque dentaire peut être considérée comme un médicament pour traiter l'athérosclérose.

Notre approche, que j'appelle la génomique en médecine, est un peu en dehors du courant dominant de la recherche en génétique des Homo sapiens. Un grand nombre de scientifiques sont impliqués dans le projet du génome humain, une collaboration internationale consacrée à la découverte de la séquence complète des bases chimiques de l'ADN chez Homo sapiens. (Tous les codes de l'ADN sont construits à partir d'un alphabet composé de seulement quatre bases.) Ces informations seront importantes pour l'étude de l'action des gènes et de l'évolution et sera particulièrement bénéfique pour la recherche sur les maladies héréditaires. Pourtant, le projet génome n'est pas le meilleur moyen de découvrir les gènes, parce que la plupart des bases qui constituent l'ADN des gènes se trouvent effectivement à l'extérieur. Ni le projet va identifier les gènes qui sont impliqués dans la maladie.

Gènes par la voie directe

Parce que la clé du développement de nouveaux médicaments se situe principalement dans les protéines produites par les gènes de l'Homo sapiens, plutôt que les gènes eux-mêmes, on peut se demander pourquoi nous ennuyer avec les gènes du tout. Nous pourrions, en principe, analyser les protéines d'une cellule directement. Connaissant la composition d'une protéine ne constitue pas, toutefois, nous permettent de le faire, et pour développer des médicaments, on doit fabriquer des quantités importantes de protéines qui semblent importantes. La seule manière pratique de le faire est d'isoler les gènes correspondants et les transplanter dans des cellules capables d'exprimer ces gènes dans les gros montants.

Notre méthode pour trouver les gènes se concentre sur un produit intermédiaire critique créée dans les cellules chaque fois qu'un gène est exprimé. Ce produit intermédiaire est appelée ARN messager (ARNm), comme l'ADN, il est constitué de séquences de quatre bases. Lorsqu'une cellule se rend ARNm d'un gène, c'est surtout des copies de la séquence de bases d'ADN dans le gène. L'ARNm sert ensuite de modèle pour la construction de la protéine spécifique codée par le gène. La valeur de l'ARNm de la recherche est que les cellules en font seulement lorsque le gène correspondant est actif. Pourtant, séquence de base de l'ARNm, étant tout simplement liée à la séquence du gène lui-même, nous donne suffisamment d'information pour isoler le gène de la masse totale de l'ADN dans les cellules et de rendre sa protéine si nous le voulons.

Pour nos besoins, le problème avec l'ARNm est qu'il peut être difficile à manipuler. Nous avons donc dans le travail fait avec un substitut parental: des copies d'ADN stable, appelé ADN complémentaires (ADNc) des molécules d'ARNm. Nous faisons les ADNc en inversant simplement le processus de la cellule utilise pour fabriquer l'ARNm de l'ADN.

Les copies d'ADNc de cette façon que nous produisons sont généralement des répliques de segments de l'ARN messager plutôt que de la molécule entière, qui peut être plusieurs milliers de bases de long. En effet, les différentes parties d'un gène peut donner lieu à des ADNc dont l'origine commune de mai ne pas être immédiatement apparent . Néanmoins, un ADNc contenant que quelques milliers de bases conserve encore la signature unique de son gène parent. C'est parce qu'il est ridiculement peu probable que deux gènes différents se partageraient une séquence identique milliers de bases de long. Tout comme un article au hasard extraites d'un article identifie de façon unique l'article, si une molécule d'ADNc identifie de manière unique le gène qui a donné naissance.

un article présenté par F. Donis

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